斑馬魚條件位置偏好（CPP）行為實驗

【服務簡介】

當某種行為（例如飲食或性活動）增加伏隔核中的多巴胺時诗茎，多巴胺的增加會轉(zhuǎn)化為動物的動機活動工坊，從而重復該行為。迄今為止敢订，大多數(shù)濫用藥物都有一個共同點王污，即提高伏隔核中的多巴胺水平。例如楚午，可卡因通過阻斷多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白的活性來提高多巴胺水平昭齐。在低等哺乳動物中模擬這種對成癮藥物的敏感性的一種方法是條件位置偏好（CPP）范式。使用各種選擇性拮抗劑的實驗表明中腦多巴胺是CPP行為的中心介質(zhì)矾柜≮寮荩咖啡因、 乙醇怪蔑、嗎啡以及安定均可導致斑馬魚成癮及戒斷里覆，而且上述成癮性物質(zhì)均能對斑馬魚的行為以及內(nèi)分泌產(chǎn)生影響，證實了斑馬魚可以作為模式生物來進行藥物依賴方面的研究缆瓣。

【實驗流程】

條件性位置偏愛魚缸

缸體積為16 cm×9 cm×9 cm喧枷。魚缸中間有一活動隔板，可以將魚缸分成體積相等的兩個箱，將隔板抽起后隧甚，魚可以在兩個箱體之間自由游動车荔。箱體的一側為褐色，另一側為透明戚扳，透明側的底部有兩個直徑為2 cm的黑色圓點夸赫。包含明顯的視覺提示，帶有穿孔的壁咖城，允許完整的運動。初步介紹該設備后呼奢，通過計算2分鐘試驗期間在給定一側花費的時間百分比來測試魚的基線偏好宜雀。在設備中表現(xiàn)出異常行為（例如游動不足或過度或基線偏好大于70%）的魚未進行進一步測試。然后將魚限制在最不喜歡的一側并暴露于通過使用飽和燈芯施用的藥物握础。第二天再次對魚進行測試辐董，通過從最終值中減去基線百分比來獲得反映可卡因獎勵效果的偏好變化。成年斑馬魚的天然偏愛箱為褐色箱禀综，故選擇透明箱作為伴藥箱简烘。測定前將實驗箱中間隔板抽出，當成年斑馬魚處于兩個箱體之間時開始計時定枷，逐條觀察15 min孤澎，以成年斑馬魚頭部為準，記錄成年斑馬魚在白箱中的停留時間欠窒。

基線測定

將斑馬魚置于獨立的用于訓練的CPP箱內(nèi)覆旭，每個CPP箱的水位不低于5 cm，以保證足夠的水壓岖妄，適應性喂養(yǎng)2 d型将。第3天測試正常狀態(tài)下所有斑馬魚的位置偏愛箱的停留時間（15 min 內(nèi)），并且用軟件來跟蹤其路線圖（5 min內(nèi)）荐虐；非偏愛箱與偏愛箱之間用一個透明擋板隔開七兜，使魚不能游過去，但又不會遮擋其視線福扬。45 min后腕铸，將魚移至較大的有藍色環(huán)境的魚缸，并且用70%的乙醇清潔黑白箱忧换，最后用系統(tǒng)水沖洗恬惯。

藥物給予

每天給斑馬魚注射待測藥物或生理鹽水訓練12 h后，將各給藥組斑馬魚淺麻醉后用微量注射器迅速腹腔注射相應的藥物溶液亚茬，然后將其移至較大的有藍色環(huán)境的魚缸酪耳。空白對照組和模型組斑馬魚注射等體積魚用生理鹽水（10 μL/條），其他處理與給藥組一致碗暗。

圖1 斑馬魚在CPP箱的運動路線圖

對斑馬魚中可卡因誘導的CPP的行為篩查與對其他物種使用的行為篩查相似颈将。僅使用野生型魚類進行的初步實驗證明了可卡因誘導的CPP具有一致且強大的效果。圖一顯示了幾個斑馬魚家族服用不同劑量的可卡因所獲得的結果言疗。使用10毫克升可卡因可獲得最大效果晴圾，85%的魚表現(xiàn)出偏好的積極變化。較低的濃度引起的反應逐漸降低噪奄，較高的濃度也是如此死姚。較高濃度的藥物可能通過與魚的外部感覺系統(tǒng)相互作用而產(chǎn)生厭惡作用。任何劑量的可卡因誘導的CPP均不存在性別差異勤篮。利多卡因與可卡因一樣都毒，可作為局部麻醉劑，但沒有效果碰缔。利多卡因通常會引起偏好變化账劲，與未經(jīng)治療的對照組結果相似。

 圖2 可卡因誘導斑馬魚的CPP

檢測參數(shù)

測試所有斑馬魚在非位置偏愛箱（伴藥箱）的停留時間以及在CPP箱的運動路線圖金抡，比較它們在非偏愛箱前后時間的差值及其游動距離瀑焦。

注意事項

給藥前用動物行為學分析系統(tǒng)對實驗成年斑馬魚進行位置偏愛測定，剔除不符合天然偏愛習慣的動物梗肝。

參考文獻

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