Aβ誘導：當腦內(nèi)Aβ的生成率高于清除率時嗤攻，過多Aβ在腦內(nèi)沉積毛嫉，從而誘發(fā)神經(jīng)毒性。同時妇菱，Aβ 還能造成線粒體產(chǎn)能障礙承粤，引起線粒體自噬、突觸丟失和細胞死亡闯团，進而加快AD的進程辛臊。Aβ誘導AD模型一般通過在實驗動物腦內(nèi)海馬體、側(cè)腦室等部位注入Aβ片段獲得房交。

截至目前彻舰，斑馬魚內(nèi)源性Aβ還未被發(fā)現(xiàn)，其體內(nèi) APP 的處理過程是否與人類相似尚不明確候味，但對野生型和轉(zhuǎn)基因斑馬魚進行Aβ功能和毒性分析是可能的∪谢剑現(xiàn)多將Aβ直接加入斑馬魚幼魚的養(yǎng)殖水中進行造模，或?qū)唏R魚麻醉后直接向側(cè)腦室注射Aβ蛋白白群。2022年尚胞，Prabesh Bhattarai等通過腦室顯微注射將Aβ42注射到成年斑馬魚大腦中，在斑馬魚中建立了急性淀粉樣變性模型帜慢，通過電鏡觀察笼裳，該模型顯示出與人腦相似的淀粉樣蛋白聚集、小膠質(zhì)細胞激活和炎癥反應粱玲、突觸變性躬柬、神經(jīng)元細胞死亡和學習記憶缺陷。該研究還發(fā)現(xiàn)抽减，在斑馬魚中發(fā)現(xiàn)的再生相關(guān)分子程序可以誘導類似人腦的體外3D培養(yǎng)系統(tǒng)的神經(jīng)源性輸出允青，這表明這些分子程序可能是AD藥物發(fā)現(xiàn)干預策略的潛在目標。

圖2 Aβ42誘導斑馬魚AD模型在疾病機制研究胯甩、早期藥物開發(fā)和臨床前研究中的應用

氯化鋁誘導：維持大腦正常認知功能離不開金屬離子穩(wěn)態(tài)昧廷，金屬離子穩(wěn)態(tài)失衡是神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的關(guān)鍵因素之一堪嫂。鋁(Aluminum，A1)木柬、銅皆串、鋰、鋅眉枕、鉛恶复、二氧化硅、氟化物速挑、汞和鐵都會引起神經(jīng)毒性谤牡。

有研究發(fā)現(xiàn)，用氯化鋁浸泡斑馬魚96h可表現(xiàn)出明顯的AD樣行為姥宝。此外2020年翅萤，顧曉群等，用六水合氯化鋁配制成100 μg/mL的染毒液腊满，持續(xù)浸泡斑馬魚30d套么，每日更換一半染毒液，可見斑馬魚端腦神經(jīng)細胞數(shù)量明顯減少碳蛋，腦組織Aβ生成相關(guān) appb胚泌、bace1、aph1 基因表達明顯增高肃弟。該研究證明了補腎益智方能夠有效地改善AD斑馬魚的學習記憶能力玷室，減少Aβ生成，減輕氧化應激反應笤受，改善AD內(nèi)環(huán)境穷缤，從而達到改善AD癥狀的作用。目前氯化鋁誘導的斑馬魚AD模型使用較為廣泛感论。

岡田酸(okadaic acid绅项，OA)誘導：OA是分布最廣泛的海洋毒素之一，極易在貝類和部分魚類中積累比肄，被人類食用后引起食物中毒。OA 本身是多種絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶抑制劑囊陡，使用后可引起全身磷酸酯酶的升高芳绩，使磷Tau蛋白在腦內(nèi)大量堆積，常用于制作體外Tau 蛋白過磷酸化的AD模型撞反。2018年妥色，Daniel Koehler等通過給斑馬魚施用岡田酸建立了AD模型。對一種新型藥物——硫代氨酸氯胺酮-5-乙酯進行了藥效試驗遏片，并闡明了其作用機制嘹害。使用OA誘導斑馬魚AD模型操作便捷且較為有效撮竿。

目前確定的AD相關(guān)基因有APP基因、早老素1(presenilin-1笔呀，PSEN-1)基因幢踏、早老素2(presenilin-2，PSEN-2)基因等许师，其致病的主要機制為影響 APP的正常代謝而導致患者腦內(nèi) Aβ1-42 的堆積房蝉。基因編輯技術(shù)的出現(xiàn)微渠，擴大了利用斑馬魚模型對AD的病理搭幻、分子機制和藥物靶點的研究。

圖3 家族性AD(FAD)中人類基因突變的斑馬魚同源物

圖4 斑馬魚基因編輯技術(shù)及其在AD病因研究中的應用

APP轉(zhuǎn)基因斑馬魚AD模型：斑馬魚有2個APP的同源基因逞盆，分別為APPa和APPb檀蹋。斑馬魚APPa類似于人類 APP770 亞型，是人類 APP 的直系同源物云芦，與aplp2一樣都是Aβ前體蛋白家族成員续扔。而APPb類似于人類 APP695 亞型，敲除該基因后可導致家族性 AD焕数，不僅可能參與AD的發(fā)病機制纱昧，且可能影響AD前的發(fā)育。有實驗通過向斑馬魚插入人APP瑞典型突變基因(APPsw)制作斑馬魚AD模型堡赔，在12月齡時可見線粒體缺失识脆、神經(jīng)元數(shù)量減少、Aβ 沉積等病理現(xiàn)象善已。有研究A152T-tau 的轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型灼捂，可見明顯的發(fā)育障礙和運動缺陷。還有研究發(fā)現(xiàn) UCP2换团、Δ133p53等基因也可影響AD的發(fā)病進程丝格。目前盛杰，使用較多的仍為AD相關(guān)的雙轉(zhuǎn)基因或多轉(zhuǎn)基因小鼠模型。

PSEN1轉(zhuǎn)基因斑馬魚AD模型：PSEN1 被認為是一個家族性AD相關(guān)的基因，該基因的突變會影響 γ-分泌酶對APP的切割和Aβ的產(chǎn)生瞒御，進而參與AD的進程。有實驗采用刪除2個密碼子的方式導致斑馬魚 PSEN1 基因突變艇炎，誘導斑馬魚早發(fā)性家族性AD病變模型耸成，可見斑馬魚腦中出現(xiàn)ATP合成障礙及溶酶體功能紊亂。

PSEN2轉(zhuǎn)基因斑馬魚AD模型：PSEN2也是目前已知的導致家族性AD的致病基因之一舌厨，但該基因的突變概率較低岂却，目前相關(guān)研究也較少。有研究利用MO抑制斑馬魚胚胎PSEN2基因制作AD模型，可見 γ-分泌酶活性降低及嚴重的發(fā)育缺陷和神經(jīng)元丟失躏哩，并通過 p53 途徑誘導細胞凋亡署浩。也有研究利用同樣的方法制作了相關(guān)模型，發(fā)現(xiàn)PSEN2活性的降低會明顯減弱斑馬魚胚胎的Notch 信號并導致神經(jīng)發(fā)育紊亂扫尺。