雜志：International Immunopharmacology

影響因子：5.6（2022）

年份：2023

通訊作者：Dingding Shenb; Qi Zhanga

摘要

炎癥被認(rèn)為與癲癇的發(fā)生有關(guān)。然而锭硼，發(fā)熱與炎癥的關(guān)系以及發(fā)熱在兒童癲癇發(fā)生發(fā)展中的機制有待進一步研究房资。在這里，我們描述了一個暴露于戊四唑（PTZ）的斑馬魚幼魚的熱療誘導(dǎo)癲癇發(fā)作的體內(nèi)模型檀头。高溫增加了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚對癲癇發(fā)作的易感性和促炎因子的產(chǎn)生轰异。GABRG2突變與發(fā)熱相關(guān)癲癇相關(guān)，我們使用表達突變?nèi)嘶騁ABRG2（F343L）的Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚模型來進一步研究炎癥在發(fā)熱誘發(fā)癲癇發(fā)作中的作用暑始。我們的數(shù)據(jù)表明搭独，高溫也增加了Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚幼魚的運動活動。雖然GABRG2突變上調(diào)了促炎因子的產(chǎn)生廊镜，但高溫并沒有顯著改變促炎因子的產(chǎn)生牙肝。脂多糖（LPS）的刺激足以增加斑馬魚幼魚的運動活性，暗示炎癥可增加發(fā)熱相關(guān)癲癇嗤朴。在PTZ誘導(dǎo)后配椭，GABRG2的表達增加，特別是在較高的溫度下雹姊。此外股缸，用地塞米松（DEX）抑制炎癥反應(yīng)可降低斑馬魚幼魚的興奮性，特別是在高溫下吱雏。最后敦姻，體外實驗證明瘾境，LPS刺激作用增加了GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染細胞中IL-1β和IL-6的產(chǎn)生。綜上所述镰惦，我們的研究表明迷守，發(fā)熱性癲癇發(fā)作可誘發(fā)神經(jīng)炎癥，而IL-1β和IL-6表達的增加可能是癲癇發(fā)生的原因陨献。發(fā)熱和炎癥之間的惡性循環(huán)可能誘發(fā)癲癇發(fā)作盒犹，而抗炎策略可能是治療發(fā)熱相關(guān)癲癇的一種潛在治療方法懂更。

關(guān)鍵詞：發(fā)熱眨业；癲癇；斑馬魚沮协；炎癥龄捡；GABAA 受體

1.引言

發(fā)燒常是兒童癲癇的誘因。雖然發(fā)熱性癲癇發(fā)作（FS）通常被認(rèn)為是良性的慷暂，但長期的復(fù)雜FS可增加腦損傷和隨之而來的不良后果的風(fēng)險聘殖，包括顳葉癲癇（TLE）、生活后期的認(rèn)知障礙和兒童時期的猝死（SUDC）行瑞。然而奸腺，在體內(nèi)發(fā)熱誘發(fā)癲癇發(fā)作的機制尚不清楚。為了了解高熱過程中癲癇發(fā)生的潛在機制血久，特別是在發(fā)育中的大腦中突照，我們利用高溫在未成熟的嚙齒動物和斑馬魚幼魚中誘發(fā)癲癇樣活動，這可能為FS的治療提供預(yù)防策略氧吐。例如讹蘑，在熱誘導(dǎo)癲癇發(fā)作的斑馬魚模型中，已經(jīng)證明瞬時受體電位香草素1和4（TRPV1/4）和NMDA型谷氨酸受體參與了癲癇發(fā)作的發(fā)生筑舅。然而座慰，高熱在兒童癲癇發(fā)生發(fā)展中的作用機制有待進一步研究。

許多證據(jù)表明翠拣，炎癥與癲癇的發(fā)生有關(guān)版仔。急性腦損傷后，腦內(nèi)迅速誘發(fā)神經(jīng)炎癥误墓，從而增加了人類和相關(guān)動物模型發(fā)生癲癇的風(fēng)險蛮粮。在癲癇發(fā)作的兒童中血漿中檢測到神經(jīng)炎癥通路的差異激活。在FS后的新生大鼠中也觀察到誘發(fā)的炎癥過程优烧，并與成年記憶缺陷有關(guān)蝉揍。臨床研究證明，特異性抗炎藥物可以減少耐藥性癲癇發(fā)作畦娄。使用地塞米松（DEX）又沾，一種廣泛的抗炎藥物弊仪，被報道可以減弱發(fā)熱性癲癇持續(xù)狀態(tài)（FSE）未成熟大鼠模型的異常奮性。DEX還可縮短發(fā)熱感染相關(guān)癲癇綜合征（FIRES）患者的危險期杖刷。由于炎癥是發(fā)熱的原因之一励饵，發(fā)熱會加重炎癥，我們推測發(fā)熱和炎癥之間的惡性循環(huán)可能誘發(fā)癲癇發(fā)作滑燃，靶向炎癥可能是癲癇治療的一種治療選擇役听。γ-氨基丁酸（GABAA）受體γ2亞基基因（GABRG2）的突變與FS和遺傳性癲癇伴熱性發(fā)作（GEFS +）相關(guān)。據(jù)報道表窘，GABAA受體的激活可以抑制促炎途徑典予，并通過減少星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的激活，在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥中發(fā)揮保護作用乐严。最近瘤袖，有人報道了一例由GABAA受體抗體介導(dǎo)的自身免疫性腦炎引起的FIRES疾病。在高溫條件下昂验，GABAergic神經(jīng)元突觸前末端的GABA釋放和再攝取功能障礙可能會增加神經(jīng)元的興奮性捂敌。以上證據(jù)表明，GABAA受體可能在發(fā)熱相關(guān)性癲癇中發(fā)揮重要作用既琴。然而占婉，促炎因子及其與GABAA受體的相互作用在癲癇發(fā)生發(fā)展中的作用目前尚不清楚。

在之前的一項研究中甫恩，我們在斑馬魚中建立了一個與GABRG2（F343L）錯義突變相關(guān)的癲癇性腦病模型逆济，進一步表明斑馬魚是一種有效的癲癇模型，可用于了解所涉及的各種機制和篩選藥物治療填物。戊四唑（PTZ）是一種GABAA受體拮抗劑纹腌，廣泛應(yīng)用于斑馬魚中闡明癲癇的發(fā)病機制。溫度的升高足以獲得斑馬魚幼魚的腦電圖（EEG）記錄滞磺。本研究旨在探討熱療對PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚癲癇模型的影響升薯，并探討其作用機制。此外击困，我們還應(yīng)用了一個過表達突變的人類GABRG2（F343L）亞基的斑馬魚模型涎劈，進一步檢測發(fā)熱相關(guān)癲癇中炎癥和GABAA受體之間的關(guān)系。

斑馬魚飼養(yǎng)和護理

斑馬魚（AB株）在我們之前的協(xié)議條件下被保存在南通大學(xué)的斑馬魚中心阅茶。Tg（hGABRG2WT）和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚由我們的實驗室建立蛛枚，并在南通大學(xué)的斑馬魚中心進行維護。所有方案和程序均遵循南通大學(xué)的機構(gòu)動物護理指南脸哀，并獲得了南通大學(xué)實驗室動物倫理委員會（20200305-001）的倫理批準(zhǔn)蹦浦。成年斑馬魚在循環(huán)水系統(tǒng)（pH為7.0 ~ 8.0）中進行14小時光照/10小時黑暗循環(huán)。這些斑馬魚每天被喂食兩次魚食撞蜂。斑馬魚胚胎和幼魚在28?C包含E3溶液的10厘米培養(yǎng)皿中培養(yǎng)盲镶，并在受精后24小時后（hpf）添加加入0.2mM PTU以抑制色素沉著侥袜。

高溫和PTZ處理

在受精后5天（dpf），將斑馬魚幼魚轉(zhuǎn)移到48孔培養(yǎng)板中溉贿，每孔有1只幼蟲枫吧。28?C是通常用來保持斑馬魚群落的溫度。當(dāng)斑馬魚接受高溫暴露時宇色，水溫設(shè)置為32?C九杂。在PTZ敏感性實驗中，加入PTZ到培養(yǎng)基中使終濃度為15 mM宣蠕。為了檢測熱療對斑馬魚的影響例隆，將動物分為四組：常溫（28?C）PTZ誘導(dǎo)組或不誘導(dǎo)組，高溫組（32?C）PTZ誘導(dǎo)組或不誘導(dǎo)組植影。

行為實驗

使用丹麥視覺視頻跟蹤系統(tǒng)（Noldus裳擎，德國）記錄在不同溫度下使用或不使用PTZ誘導(dǎo)下斑馬魚30 min運動活性。對于LPS刺激思币，在不同溫度下5 dpf的斑馬魚幼魚培養(yǎng)基中加入80 μg/mL LPS。用濃度為（1 μg/mL）的DEX抑制斑馬魚幼魚的炎癥反應(yīng)羡微。使用EthoVision XT運動跟蹤軟件版本（Noldus谷饿，德語）分析運動活性。記錄并分析了所運動總距離妈倔。自發(fā)性癲癇發(fā)作樣活動被定義為癲癇發(fā)作評分系統(tǒng)博投，以評估斑馬魚幼魚的行為變化并從0期到3期進行分類：第0階段，特征為很少游泳活動盯蝴；第1階段毅哗，特征為游泳活動普遍增加；第2階段捧挺，快速“漩渦狀”虑绵；第3階段，特征為抽搐后失去姿勢闽烙。在PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚或Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚中記錄了達到2/3階段的潛伏時間翅睛。

腦電圖（EEG）記錄

采用MD3000生物信號采集與處理系統(tǒng)（安徽正華，中國）對斑馬魚進行腦電圖記錄黑竞。簡而言之捕发，將斑馬魚包埋在記錄介質(zhì)溶液（1 mM氯化鈉，2.9 mM氯化鉀很魂，10 mM HEPES扎酷，1.2 mM氯化鎂，10 mM葡萄糖遏匆，2.1 mM氯化鈣）中法挨，用1.2 %低融化瓊脂糖和0.02 %三卡因麻醉動物骤铃。在電壓電阻配置中，使用膜片鉗放大器測量電極電阻坷剧，以確定正確的值惰爬。膜片鉗放大器的放大倍數(shù)為1000，上限為10000Hz惫企，時間常數(shù)為0.5 ms撕瞧，高通濾波器為100 Hz。對每只斑馬魚的電極進行場電位（FP）記錄狞尔。量化最大振幅和癲癇樣放電事件的數(shù)量丛版。

定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRTPCR）

記錄運動活動后，用TRIzol試劑（Invitrogen偏序，USA）從斑馬魚胚胎的大腦中提取總RNA页畦。根據(jù)制造商的說明，使用Omniscript RT試劑盒（Qiagen研儒，美國）將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA豫缨。采用SYBR green mix（諾唯贊，中國）進行qRT-PCR端朵，檢測不同條件下c-fos好芭、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達冲呢。以β-actin作為內(nèi)參基因舍败。數(shù)據(jù)歸一化為內(nèi)參基因β-actin，并相對于對照幼魚的表達進行定量敬拓。數(shù)值代表了圖注中所示的幾個獨立生物樣本的平均值邻薯，每個樣本包括10個匯集的幼魚。

整體原位雜交（WISH）

斑馬魚幼魚的WISH按照Thisse的方案進行乘凸，并進行了修改厕诡。簡單地說，我們設(shè)計了引物序列并用用DIG-RNA標(biāo)記試劑盒（Roche翰意，瑞士）合成了DIG標(biāo)記的c-fos正義探針和反義探針木人。行為實驗后，收集斑馬魚幼魚冀偶，用4%多聚甲醛（PFA）在磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中固定過夜醒第，并如前所述進行雜交。

免疫印跡

從斑馬魚幼魚的大腦中提取總蛋白进鸠，然后用BCA分析進行定量稠曼。20個μg蛋白經(jīng)SDS-PAGE分離，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上客年。該膜用5%的脫脂奶粉在Tris緩沖鹽水（TBS霞幅，pH 7.4）中封閉漠吻，并與指示抗體在4?C下孵育過夜。用TBS/T（含0.1%Tween20的TBS）洗滌后司恳，將HRP偶聯(lián)親和純化的驢兔抗IgG（1：5000）或山羊鼠抗（1：5000）在室溫下孵育2h途乃。用ECL底物孵育膜，用成像系統(tǒng)進行掃描（Tanon扔傅，上海耍共，中國）。使用ImageJ1.8.0軟件（貝塞斯達猎塞，馬里蘭州试读，美國）對圖像進行分析。

細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

人胚胎腎（HEK）293 T細胞在添加10 %胎牛血清的DMEM中荠耽，37?C钩骇，95%空氣和5%二氧化碳的潮濕氣氛中培養(yǎng)。培養(yǎng)基每兩天更換一次铝量。將編碼人GABAA受體α1倘屹、β2和γ2亞基的cDNA亞克隆到pcDNA3.1載體中。轉(zhuǎn)染前一天款违，將細胞以1×106個細胞/mL的密度置于10厘米的培養(yǎng)皿中唐瀑。按照聚乙烯亞胺（PEI）試劑（40kD，Polyscinces）的方案進行轉(zhuǎn)染插爹。共轉(zhuǎn)染了3 mg的GABAA受體cDNA。DNA：PEI的比例為1mg：2.5ml请梢，α1：β2：γ2亞基的cDNA比例為1：1：1赠尾。

細胞活力分析

轉(zhuǎn)染48 h后，將細胞置于96孔板中毅弧，用1 μg/mL LPS或100 nM/L TNF-α處理气嫁。在LPS或TNF-α孵育24 h后，采用細胞計數(shù)試劑盒-8（CCK-8）法檢測細胞活力够坐。用ELx-800酶標(biāo)儀（Bio-Tek Inc.寸宵，Winooski，VT元咙，USA）在450 nm處的分光光度法測定吸光度（光密度梯影，OD）。

統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)用平均± SEM表示庶香。在GraphPad Prism 8.0（GraphPad甲棍，圣地亞哥，CA赶掖，USA）中進行統(tǒng)計分析感猛。使用未配對Student’st-test或雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗來比較組間的差異七扰。正態(tài)分布采用Kolmogorov-Smirnov 檢驗進行分析。P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義陪白。

高溫增加了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚癲癇發(fā)作的易感性

為了確定短期溫度升高對斑馬魚幼魚PTZ誘發(fā)癲癇易感性的影響颈走，分別將斑馬魚暴露于28?C和32?C的PTZ。測量癲癇發(fā)作評分咱士、旅行距離和斑馬魚達到癲癇發(fā)作階段（階段2或階段3）的潛伏期立由。在28?C時，根據(jù)視頻跟蹤系統(tǒng)司致，幼蟲表現(xiàn)出較低的運動能力（圖1A）拆吆，在30 min范圍內(nèi)的平均旅行距離為1325±185mm（圖1B）。當(dāng)環(huán)境溫度設(shè)置為32?C時脂矫，游泳活動略有增加枣耀，總距離為2693±230mm（圖1b）（P<0.0001疾瓮，Tukey’s檢驗）刁憋。經(jīng)15 mM PTZ處理后缚柳，斑馬魚幼魚的代表性游泳軌跡運動活動顯著增加（圖1A）士修，28?C平均距離為9415±201mm饶米，32?C平均距離為10680±210mm（圖1B）（P=0.0003遗嗽，Tukey檢驗）蘸秘。

采用未成熟斑馬魚癲癇發(fā)作行為評分系統(tǒng)來評估不同溫度下PTZ誘導(dǎo)下的行為變化裹芝。在沒有PTZ刺激的情況下恨搓，所有斑馬魚幼魚均處于第0或第1階段院促，而PTZ暴露的幼魚均達到第2或第3階段（圖1C），表明PTZ在兩種溫度下都誘導(dǎo)了癲癇樣行為斧抱。然而常拓，當(dāng)溫度從28?C上升到32?C時，斑馬魚幼魚達到第3階段的比例從35.00 %上升到68.33 %辉浦。為了研究不同水溫和PTZ暴露對斑馬魚行為的影響弄抬，我們計算了斑馬魚達到癲癇發(fā)作階段的時間潛伏期。暴露在PTZ斑馬魚幼魚到達的第2/3階段潛伏時間從28?C時的119 ± 4 s下降到32?C時的96±4s（圖1D）（P < 0.0001宪郊，未配對Student’s t-test）掂恕。這些數(shù)據(jù)表明，高溫增加了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚對癲癇發(fā)作的易感性弛槐。

圖1 溫度對PTZ暴露條件下斑馬魚幼魚運動活動的影響懊亡。(A)采用丹麥視覺XT運動跟蹤軟件在丹麥視覺視頻跟蹤系統(tǒng)中記錄斑馬魚幼魚30 min后的運動活動。在5 dpf時丐黄，斑馬魚接受不同的溫度（28?C和32?C）斋配，暴露或不暴露15 mM PTZ。(B)對每一組的總旅行距離進行量化（每一組的n=24）。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示艰争。** P < 0.01通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗坏瞄。溫度，F(xiàn)（1,92）= 38.74甩卓；PTZ鸠匀，F(xiàn)（1,92）= 1444；溫度×PTZ相互作用逾柿，F(xiàn)（1,92）= 0.05816缀棍。(C)癲癇發(fā)作評分通過錄像獲得，條形圖顯示了不同癲癇發(fā)作階段的幼魚的百分比（每組n=74）机错。(D)斑馬魚幼魚達到第2期或第3期的潛伏期（每組n=120）爬范。** P < 0.01采用未配對Student’s t檢驗。

采用前腦場電位記錄法弱匪，觀察PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚在短暫溫度升高時的癲癇發(fā)作活動青瀑。PTZ的誘導(dǎo)導(dǎo)致了多尖峰、大振幅和長持續(xù)時間的突發(fā)放電萧诫，這與之前的報道相似（圖2A）斥难。高溫沒有引起顯著的癲癇發(fā)作活動，而異常放電隨著PTZ的暴露而增加（圖2A）帘饶。在兩種溫度下哑诊，PTZ誘導(dǎo)最大振幅顯著增加（43.01 ± 9.98 μV vs 11.04 ± 0.82 μV在28?C，P=0.0284及刻，Tukey檢驗镀裤；73.12 ± 7.39 μV vs 21.87 ± 1.52 μV在32?C，P=0.0019缴饭，Tukey檢驗）（圖2B）淹禾。高溫只增加了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚的振幅（P=0.0381，Tukey’s檢驗）（圖2B）茴扁。此外，我們還比較了各組間的癲癇樣放電事件汪疮。PTZ增加了兩種溫度下每秒放電事件數(shù)(22.00 ± 1.73對0.33 ± 0.33峭火，P = 0.0002；32?C時± 3.22和0.67 ± 0.33智嚷，P < 0.0001卖丸，熱療僅增加了斑馬魚的事件數(shù)（P = 0.0350，圖基測試）（圖2C）盏道。

c-fos是一種即時早期轉(zhuǎn)錄因子稍浆，在動物模型中作為癲癇發(fā)作的標(biāo)志，包括經(jīng)PTZ處理的斑馬魚幼魚。因此衅枫，我們利用WISH和qRT-PCR在5 dpf條件下進一步研究了不同溫度下斑馬魚幼魚中cfos的表達嫁艇。在28?C時，在整個大腦中表現(xiàn)出的c-fos表達水平非常低（圖2D和2E）弦撩。雖然升高的溫度沒有顯著改變c-fos的表達（1.34 ± 0.37在32?C步咪，對照組在28?C作為1），PTZ誘導(dǎo)了中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的強勁增加益楼，包括端腦猾漫、視神經(jīng)頂蓋、中腦和后腦特別是在32?C（32?C時92±10 vs 28?C 43±7）（P=0.0002感凤，Tukey’s檢測）悯周。以上數(shù)據(jù)表明，在PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚模型中陪竿，高溫能夠通過上調(diào)c-fos的表達來誘導(dǎo)癲癇樣行為禽翼。

圖2 PTZ暴露不同溫度下斑馬魚幼魚大腦c-fos活性和表達。(A)在28?C和32?C條件下萨惑，斑馬魚幼魚的代表性現(xiàn)場記錄捐康。(B)各組最大振幅的量化（每組n=3）。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示庸蔼。* P < 0.05解总，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗姐仅。溫度花枫，F(xiàn)（1,8）= 10.66；PTZ掏膏，F(xiàn)（1,8）= 44.07劳翰；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,8）= 2.365馒疹。(C)各組癲癇樣出院事件的量化（每組n=3）佳簸。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示。* P < 0.05颖变，** P < 0.01生均，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗。溫度腥刹，F(xiàn)（1,8）= 6.426马胧；PTZ，F(xiàn)（1,8）= 199.5衔峰；溫度×PTZ相互作用佩脊，F(xiàn)（1,8）= 5.541蛙粘。(D)全貼式原位雜交（WISH）檢測斑馬魚幼蟲在28?C和32?C下C-mosmRNA的表達，以及5 dpf下15 mM PTZ的暴露威彰。c-fos在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）陽性表達表現(xiàn)為深紫色出牧。(E)不同處理后斑馬魚幼魚大腦中c-fos mRNA水平的定量分析。數(shù)據(jù)歸一化為內(nèi)參基因β-actin抱冷，無PTZ暴露常溫（28?C）組c-fos mRNA的相對表達量設(shè)為“1’”（每組n=6崔列，一個樣本混合10個幼蟲）。** P < 0.01通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗旺遮。溫度赵讯，F(xiàn)（1,20）= 13.58；PTZ耿眉，F(xiàn)（1,20）= 98.06边翼；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,20）= 13.21鸣剪。

高溫促進了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚產(chǎn)生促炎因子

IL-1β组底、IL-6和TNF-α是中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的主要促炎因子。在5 dpf時筐骇，斑馬魚接受不同的溫度（28?C和32?C）债鸡，暴露或不暴露15 mM PTZ處理。采用qPCR方法檢測促炎細胞因子IL-1β铛纬、IL-6厌均、TNF-α的表達。我們發(fā)現(xiàn)上述3種細胞因子在32?C時均增加告唆，但在對照組中沒有棺弊。雖然高溫增加了促炎細胞因子的生產(chǎn)，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義擒悬。對于IL-1β模她，在每個溫度下，隨著PTZ暴露其表達量顯著增加（圖3A）懂牧，而IL-6和TNF-α僅在32?C時隨PTZ暴露而增加（圖3B和3C)侈净。此外，PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚在不同溫度下各促炎因子的差異顯著僧凤。結(jié)果表明用狱，高溫可能增加了PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚促炎因子的產(chǎn)生。

圖3 PTZ暴露下不同溫度下斑馬魚幼魚促炎細胞因子的表達拼弃。在5 dpf時，斑馬魚接受不同的溫度（28?C和32?C）摇展，暴露或不暴露15 mM PTZ吻氧。用qPCR檢測促炎細胞因子IL-1β (A)、IL-6 (B)和TNF-α (C)的表達（每組n=6，共混合10個幼蟲）盯孙。對照組在28?C時各細胞因子的表達量任意取為1鲁森。* P < 0.05和** P < 0.01，通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗振惰。(A)溫度歌溉，F(xiàn)（1,20）= 8.163；PTZ骑晶，F(xiàn)（1,20）= 41.27痛垛；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,20）= 1.748桶蛔；(B)溫度匙头，F(xiàn)（1,20）= 7.674；PTZ仔雷，F(xiàn)（1,20）= 9.504蹂析；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,20）= 4.164碟婆；(C)溫度电抚，F(xiàn)（1,20）= 6.719；PTZ竖共，F(xiàn)（1,20）= 15.51蝙叛；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,20）= 2.463肘迎。

高溫增加了Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚幼魚的運動活性甥温，而不影響促炎因子的產(chǎn)生

為了進一步研究高溫對癲癇發(fā)生中炎癥過程的影響，我們應(yīng)用了一個表達突變?nèi)薌ABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚系妓布。突變體GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚表現(xiàn)出自發(fā)的癲癇發(fā)作活動和驚厥行為姻蚓，可作為一個再現(xiàn)人類癲癇綜合征的有用模型。通過視頻跟蹤系統(tǒng)記錄了轉(zhuǎn)基因斑馬魚在不同溫度下的運動活動（圖4A）匣沼。在28?C下狰挡，Tg（hGABRG2F343L）在30 min中的平均旅行距離為2898 ± 184 mm，遠高于轉(zhuǎn)染野生型（WT）GABRG2的對照組（889±151mm）（圖4B）释涛。當(dāng)環(huán)境溫度升高到32?C時加叁，F(xiàn)343L和WT斑馬魚的總距離分別增加到3898 ± 271 mm和1706 ± 212 mm，F(xiàn)343L突變體組更高（圖4B）唇撬，暗示高溫增加了突變體GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚的運動活性它匕。雙盲癲癇評分評估還顯示，所有的斑馬魚幼蟲在階段0或階段1WT組在28?C和32?C窖认，而在F343L組豫柬，大多數(shù)幼魚（95.83 %）留在階段1和2.08 %的幼魚達到階段2在28?C告希。隨著溫度的升高，8.51 % F343L轉(zhuǎn)基因斑馬魚在第2階段烧给，8.51 %的幼魚達到第3階段（圖4C）燕偶，達到第2/3階段的潛伏期從28?C時的837 ± 113 s下降到32?C時的342 ± 45 s（圖4D）。暗示高溫也增加了Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚幼魚癲癇發(fā)作的易感性础嫡。

圖4 熱療對Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚品系運動能力的影響指么。在5 dpf時，Tg（hGABRG2WT）和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚處于不同的溫度（28?C和32?C）榴鼎。(A)在28?C和32?C下伯诬，用etho視覺XT運動跟蹤軟件記錄野生型GABRG2或突變型GABRG2（F343L）的斑馬魚幼魚30 min的運動活動。(B)分析每組的總旅行距離（每組n=42）檬贰。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示姑廉。* P < 0.05和** P < 0.01，通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗翁涤。溫度桥言，F(xiàn)（1,164）= 18.47；F343L葵礼，F(xiàn)（1,164）= 98.57号阿；溫度×F343L相互作用，F(xiàn)（1,164）= 0.1875鸳粉。(C)通過錄像獲得癲癇發(fā)作評分扔涧，條形圖顯示不同癲癇發(fā)作階段的幼魚百分比（每組n=60）。(D)Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚幼魚達到第2期或第3期的潛伏期（每組n=22）届谈。** P < 0.01采用未配對Studeent’s t-test枯夜。

場電位記錄顯示，F(xiàn)343L組存在多峰放電（圖5A）艰山，在兩種溫度下湖雹，最大振幅均比WT組增加（圖5B)。在兩種溫度下曙搬，F(xiàn)343L組每秒放電事件數(shù)也增加摔吏，而高溫只增加了F343L組的事件數(shù)量（圖5C)。WISH圖像顯示廣泛的c-fos在整個大腦中表達纵装，特別是在32?C時征讲。雖然溫度升高對WT組c-fos的表達沒有顯著影響，F(xiàn)343L組的c-fos隨溫度的升高而顯著升高（圖5E)橡娄。以上數(shù)據(jù)表明诗箍，在Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚中，高溫也可以通過上調(diào)c-fos的表達來誘發(fā)癲癇樣行為挽唉。

圖5  Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚在不同溫度下c-fos的腦活動和表達扳还。(A)從Tg（hGABRG2WT）和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚幼魚在28?C和32?C下獲得的代表性現(xiàn)場記錄才避。(B)各組最大振幅的量化（每組n=3）。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示氨距。* P < 0.05，** P < 0.01棘劣，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗俏让。溫度，F(xiàn)（1,8）= 1.504茬暇；F343L首昔，F(xiàn)（1,8）= 46.68；溫度×F343L相互作用糙俗，F(xiàn)（1,8）= 1.039勒奇。(C)各組癲癇樣出院事件的量化（每組n=3）。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示巧骚。* P < 0.05赊颠，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗劈彪。溫度竣蹦，F(xiàn)（1,8）= 6.231；F343L沧奴，F(xiàn)（1,8）= 192.3痘括；溫度×F343L相互作用，F(xiàn)（1,8）= 6.231滔吠。(D) WISH檢測Tg（hGABRG2WT）和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚在28?C和32?C在5 dpf時c-fos mRNA的表達纲菌。c-fos陽性表達呈深紫色。(E)轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚大腦中c-fos mRNA水平的定量分析疮绷。數(shù)據(jù)歸一化為內(nèi)參基因β-actin翰舌，WT組在常溫（28?C）下c-fos mRNA的相對表達量設(shè)為“1’”（每組n=6,1個樣本混合10個幼蟲）。** P < 0.01通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗矗愧。溫度灶芝，F(xiàn)（1,20）= 2.314；F343L唉韭，F(xiàn)（1,20）= 19.18夜涕；溫度×F343L相互作用，F(xiàn)（1,20）= 0.2306属愤。

在突變體GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚中也檢測到了促炎因子女器。突變GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚顯示IL-1β和IL-6表達在正常溫度下與WT組相比增加（圖6A-C）。與未轉(zhuǎn)染的斑馬魚相反住诸，高溫并不影響WT或突變體轉(zhuǎn)基因斑馬魚中IL-1β驾胆、IL-6和TNF-α的表達（圖6A-C）涣澡。

圖6 LPS或DEX在不同溫度下對Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚運動活性和促炎細胞因子的影響。用qPCR方法檢測Tg（hGABRG2WT）和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚（每組n=-4~6）中IL-1β (A)丧诺、IL-6 (B)和TNF-α (C)的表達入桂。將28?C時Tg（hGABRG2WT）斑馬魚中各細胞因子的表達量任意取為1。* P < 0.05驳阎，** P < 0.01抗愁，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗。(A)溫度呵晚，F(xiàn)（1,20）= 3.361蜘腌；F343L，F(xiàn)（1,20）= 8.307饵隙；溫度×F343L相互作用撮珠，F(xiàn)（1,20）= 1.878，(B)溫度金矛，F(xiàn)（1,16）= 2.457芯急；F343L，F(xiàn)（1,16）= 15.34绷柒；溫度×F343L相互作用志于，F(xiàn)（1,16）= 3.425，(C)溫度废睦，F(xiàn)（1,12）= 7.222伺绽；F343L，F(xiàn)（1,12）= 8.493嗜湃；溫度×F343L相互作用奈应，F(xiàn)（1,12）= 0.0009071。(D) Tg（hGABRG2WT）斑馬魚和Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚在不同溫度（28?C和32?C）购披，LPS（80 μg/mL）或DEX（1 μg/mL）暴露杖挣。對每組行走的總距離進行量化，數(shù)據(jù)以平均± SEM表示（每組n=32）刚陡。* P < 0.05惩妇，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗筐乳。溫度歌殃，F(xiàn)（1,186）= 3.413；藥物蝙云，F(xiàn)（2,186）= 43.69氓皱；溫度×藥物相互作用，F(xiàn)（2,186）= 3.876。(E)F343L斑馬魚幼蟲經(jīng)LPS或DEX暴露達到第2期或第3期的潛伏期（每組n=3）波材。* P < 0.05股淡，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗廷区。溫度唯灵，F(xiàn)（1,12）= 32.08；F343L隙轻，F(xiàn)（2,12）= 20.77早敬；溫度×F343L相互作用，F(xiàn)（2,12）= 3.476大脉。(F)用qPCR檢測Tg（hGABRG2F343L）斑馬魚在不同溫度下（28?C和32?C）中IL-1β、IL-6和TNF-α的表達（每組=3,10只幼蟲）水孩。F343L組各細胞因子的表達量任意取1镰矿，圖中數(shù)據(jù)為DEX處理后與處理前的表達量比例。

抑制炎癥反應(yīng)可降低PTZ誘導(dǎo)或GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染斑馬魚幼魚的興奮性

DEX是一種廣泛使用的用于治療炎癥的皮質(zhì)類固醇俘种。在這里秤标，我們使用DEX來檢測抑制炎癥是否可以降低PTZ誘導(dǎo)或突變GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染斑馬魚的興奮性。在未轉(zhuǎn)染的斑馬魚中宙刘，DEX處理對斑馬魚的活性沒有明顯影響（圖7A）苍姜。在PTZ誘導(dǎo)斑馬魚中，DEX降低了兩者在28?C時的旅行距離（圖7B)悬包。PTZ誘導(dǎo)斑馬魚達到2/3期的潛伏期沒有顯著變化（圖7C）衙猪。在PTZ誘導(dǎo)的28?C和32?C的斑馬魚中，促炎因子的表達降低（圖7D)布近。結(jié)果表明垫释，抑制炎癥反應(yīng)可降低PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚或GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染的興奮性。

在突變體GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚中撑瞧，只有在32?C下棵譬，DEX處理才降低了旅行距離（圖6D）。與PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚相反预伺，在32?C時订咸，DEX處理后，GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚達到2/3期的潛伏期顯著降低（圖6E)酬诀。然而脏嚷，在兩種溫度下，促炎因子的表達均無顯著變化（圖6F）料滥。

圖7 LPS或DEX對不同溫度下斑馬魚幼魚運動活動和促炎細胞因子的影響然眼。(A)在5 dpf時，斑馬魚在不同溫度（28?C和32?C）葵腹，LPS（80 μg/mL）或DEX（1 μg/mL）暴露高每。對每組行走的總距離進行量化屿岂，數(shù)據(jù)以平均± SEM表示（每組n=32）。* P < 0.05鲸匿，** P < 0.01爷怀，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗。溫度带欢，F(xiàn)（1,186）= 30.19运授；藥物，F(xiàn)（2,186）= 25.25乔煞；溫度×藥物相互作用吁朦，F(xiàn)（2,186）= 2.662。(B)PTZ（15mM）誘導(dǎo)的斑馬魚在不同溫度（28?C和32?C）下渡贾，用LPS（80 μg/mL）或DEX（1 μg/mL）暴露逗宜。對每組行走的總距離進行量化，數(shù)據(jù)以平均± SEM表示（每組n=40）空骚。* P < 0.05纺讲，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗囤屹。溫度熬甚，F(xiàn)（1,234）= 12.69；藥物肋坚，F(xiàn)（2,234）= 183.3乡括；溫度×藥物相互作用，F(xiàn)（2,234）= 6.534冲簿。(C)PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚經(jīng)LPS或DEX暴露達到第2期或第3期的潛伏期（每組n=22）粟判。* P < 0.05通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗。溫度峦剔，F(xiàn)（1,126）= 10.93档礁；藥物，F(xiàn)（2,126）= 4.940吝沫；溫度×藥物相互作用呻澜，F(xiàn)（2,126）= 1.611。(D)用qPCR檢測PTZ誘導(dǎo)的不同溫度（28?C和32?C）下斑馬魚IL-1β惨险、IL-6和TNF-α的表達（每組n=4~6羹幸，幼魚10個混合）。PTZ組中各細胞因子的表達量任意取1辫愉，圖中數(shù)據(jù)為DEX處理后與處理前的表達量比例栅受。* P < 0.05和** P < 0.01通過非配對Student’s t-test。

高溫改變了斑馬魚幼魚體內(nèi)GABRG2的表達

在許多癲癇模型中，GABRG2亞基表達的改變可能是導(dǎo)致癲癇發(fā)生的原因屏镊。在這里依疼，我們檢測到在28?C和32?C時，PTZ刺激下斑馬魚大腦中GABRG2的表達上調(diào)而芥。在較高的溫度下律罢，其上調(diào)尤其顯著（圖8a和8B）。

圖8 不同溫度下PTZ暴露對GABRG2表達的變化棍丐。(A)在5 dpf時误辑，斑馬魚接受不同的溫度（28?C和32?C），暴露或不暴露15 mM PTZ歌逢。用Western印跡法檢測斑馬魚幼魚大腦中GABRG2蛋白表達水平的代表性圖像巾钉。采用GAPDH作為內(nèi)加載對照。(B)GABRG2（n=4）秘案。數(shù)據(jù)以平均± SEM表示睛琳。** P < 0.01采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗。溫度踏烙，F(xiàn)（1,12）= 68.83；PTZ历等，F(xiàn)（1,12）= 202.5讨惩；溫度×PTZ相互作用，F(xiàn)（1,12）= 27.96寒屯。

LPS增加了轉(zhuǎn)染突變GABRG2亞基的HEK293T細胞的促炎因子

為了進一步證實促炎因子在體外對癲癇中的作用荐捻，我們測定了在LPS或TNF-α刺激下表達突變體GABRG2（F343L）亞基的HEK293T細胞的細胞活力。CCK-8數(shù)據(jù)顯示寡夹，LPS不影響細胞活力处面，而在WT GABRG2或突變GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染的細胞中，TNF-α顯著降低了細胞活力（圖9A)菩掏。LPS處理后魂角，IL-1β和IL-6表達在突變GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染細胞增加，而不是WT GABRG2轉(zhuǎn)染細胞（圖9B和9C）智绸。LPS刺激對TNF-α的產(chǎn)生沒有顯著影響（圖9D）野揪。數(shù)據(jù)表明，LPS刺激增加了突變體GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)染細胞中IL-1β和IL-6的產(chǎn)生瞧栗，這與體內(nèi)實驗一致斯稳，且促炎因子的產(chǎn)生并不依賴于癲癇發(fā)作的發(fā)生。結(jié)果還表明迹恐，IL-1β和IL-6均有升高可能與PTZ誘導(dǎo)和突變的GABRG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚的癲癇發(fā)生有關(guān)挣惰。

圖9 LPS和TNF-α對轉(zhuǎn)染了α1、β2和γ2 GABAA受體亞基的HEK293T細胞的影響。將表達GABAA受體α1憎茂，β2珍语，和γ2亞基（WT）或γ2亞基（F343L）的HEK293T細胞用1 μg/mL LPS或100 nM/L TNF-α處理24小時。(A)細胞采用CCK-8法評估細胞活力（每組n=11）唇辨。** P < 0.01通過雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗廊酣。F343L，F(xiàn)（1,58）= 1.113赏枚；藥物亡驰，F(xiàn)（2,58）= 437.5；F343L×藥物相互作用饿幅，F(xiàn)（2,58）= 17.26凡辱。用qPCR（n = 5）檢測轉(zhuǎn)染的HEK293T細胞中IL-1β (B)、IL-6 (C)和TNF-α (D)的表達栗恩。* P < 0.05透乾，** P < 0.01，采用雙向方差分析和隨后的Tukey多重比較檢驗磕秤。(B) F343L乳乌，F(xiàn)（1,24）= 5.700；藥物市咆，F(xiàn)（2,24）= 6.389汉操；F343L×藥物相互作用，F(xiàn)（2,24）= 4.635蒙兰。(C) F343L磷瘤，F(xiàn)（1,24）= 8.839；藥物搜变，F(xiàn)（2,24）= 13.63采缚；F343L×藥物相互作用，F(xiàn)（2,24）= 3.944挠他。(D) F343L扳抽，F(xiàn)（1,24）= 0.9603；藥物殖侵，F(xiàn)（2,24）= 41.07摔蓝；F343L×藥物相互作用，F(xiàn)（2,24）= 0.3541愉耙。

討論

FS是最常見的兒童癲癇發(fā)作形式贮尉，發(fā)生在3-5%的5歲前兒童。FS可分為簡單FS或復(fù)雜FS朴沿。復(fù)雜的FS往往會導(dǎo)致嚴(yán)重的后果和共病猜谚，需要適當(dāng)?shù)闹委煱苌啊榱诉M一步研究FS的相關(guān)機制，我們在本研究通過PTZ暴露或突變GABRG2（F343L）表達建立了兩種具有FS表型的熱誘導(dǎo)斑馬魚模型魏铅。我們證實昌犹，在這兩種模型中，熱療增加了對癲癇發(fā)作的易感性和神經(jīng)元活動览芳，并且神經(jīng)炎癥參與了熱療誘導(dǎo)的癲癇斜姥，這表明炎癥是治療發(fā)燒相關(guān)性癲癇的一個靶點。

炎癥過程已經(jīng)在許多癲癇發(fā)作和癲癇的實驗?zāi)Ｐ鸵约鞍d癇患者中被觀察到沧竟，這表明神經(jīng)炎癥在癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度和發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用铸敏。在PTZ誘導(dǎo)大鼠海馬體模型中，IL-1β及其受體顯著增加悟泵。我們的數(shù)據(jù)還表明杈笔，PTZ能夠在常溫下誘導(dǎo)斑馬魚幼魚產(chǎn)生IL-1β，這與之前的研究結(jié)果一致糕非。此外蒙具，我們還證實了突變體GARBG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚中IL-1β和IL-6的增加，這可能是導(dǎo)致較高的癲癇易感性的原因朽肥。在電刺激大鼠模型中禁筏，海馬內(nèi)給予LPS可增加IL-1β的表達和谷氨酸的濃度，從而促進癲癇的發(fā)生衡招。與對照組相比融师，重度癲癇患者血清中HMGB1、TLR4蚁吝、TNF-α、IL- 1β舀射、IL-1R1水平均升高窘茁。這些炎癥介質(zhì)有多種來源，包括神經(jīng)膠質(zhì)細胞脆烟、神經(jīng)元山林、外周血免疫細胞和血腦屏障的內(nèi)皮細胞。此外邢羔，HMGB1抑制劑通過調(diào)節(jié)HMGB1/TLR4/NF-κB通路驼抹，在PTZ誘導(dǎo)的成年斑馬魚慢性癲癇發(fā)作模型中發(fā)揮了抗驚厥作用。胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子（TARC）拜鹤，也被稱為CC趨化因子配體17框冀，是另一個有前途的耐藥性癲癇患者的生物標(biāo)志物。上述實驗研究結(jié)合臨床觀察表明敏簿，這些細胞因子是新的癲癇標(biāo)志物和難治性癲癇治療策略的潛在靶點明也。FS及相關(guān)癲癇綜合征涉及免疫機制宣虾，但其確切的潛在致病過程尚未闡明。在新生大鼠中温数，皮質(zhì)和海馬中TNF-α绣硝、IL-1β和TLR4的增加與FS相關(guān)。據(jù)報道撑刺，全身給藥LPS增加了海馬和下丘腦中IL-6和TNF-α的產(chǎn)生鹉胖。在這里，我們證明了熱療只誘導(dǎo)PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚產(chǎn)生促炎因子够傍，而不誘導(dǎo)突變的GARBG2（F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚甫菠，這表明突變的GABRG2可能隨著溫度增加而影響促炎因子的產(chǎn)生。我們證明王带，LPS誘導(dǎo)的炎癥足以增加在更高溫度下的運動活性淑蔚，抑制炎癥可以降低PTZ誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚的興奮性。許多促炎細胞因子的產(chǎn)生愕撰，包括IL-1β刹衫、IL-6和TNF-α，可以通過LPS刺激介導(dǎo)激TLR4和激活核因子-kappaB（NF-κB）系統(tǒng)搞挣。TLR4是促炎分子HMGB1的受體带迟，而HMGB1/TLR4通路的激活已在各種實驗性致癲癇性損傷研究中得到證實。體外實驗進一步表明囱桨，LPS誘導(dǎo)了炎癥因子IL-1β和IL-6的產(chǎn)生仓犬，這與體內(nèi)實驗結(jié)果一致。由于TNF-α在體外不受LPS刺激的顯著影響舍肠，體內(nèi)TNF-α的增加可能是癲癇發(fā)作的結(jié)果搀继，從而損害腦細胞活力。有證據(jù)表明翠语，神經(jīng)炎癥和癲癇發(fā)作之間可能存在相互作用叽躯。

炎癥在癲癇中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，它成為治療目標(biāo)發(fā)熱癲癇TAK- 242肌括，一個特定的TLR4抑制劑点骑，可以減少炎癥細胞因子和TLR4表達皮質(zhì)和海馬，增加癲癇閾值和減少癲癇發(fā)作持續(xù)時間谍夭，表明抑制炎癥可能有利于控制FS和TLR4是FS治療的潛在目標(biāo)黑滴。一些抗炎療法，包括皮質(zhì)類固醇和靜脈免疫球蛋白（IVIg）紧索，也被報道在治療發(fā)燒相關(guān)癲癇方面有一些效果袁辈，但在大多數(shù)情況下，它們不足以預(yù)防癲癇發(fā)生珠漂。在我們的實驗中吵瞻，我們證明了DEX對炎癥的抑制對PTZ誘導(dǎo)的癲癇模型和高溫誘導(dǎo)的Tg（hGABRG2F343L）轉(zhuǎn)基因斑馬魚具有抗驚厥作用葛菇，進一步為炎癥是FS的治療靶點提供了一個很有希望的論點。

炎癥可能通過影響谷氨酸和GABA神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及它們的受體的調(diào)節(jié)橡羞，從而參與癲癇發(fā)眯停。在2-5天的大鼠中，熱療后腦脊液中GABA水平下降卿泽，這是通過抑制谷氨酸脫羧酶（GAD）活性來介導(dǎo)的莺债，從而導(dǎo)致發(fā)熱性驚厥。在PTZ處理的大鼠中签夭，海馬體中GABAA受體α1和γ2亞基的表達增加齐邦。GABAA受體γ2亞基，GABRG2第租，與廣泛性癲癇綜合征相關(guān)措拇，而GABRG2的突變或缺失已被報道通過GABAergic通路信號中斷與FS和GEFS +相關(guān)。通過GABAA受體調(diào)節(jié)劑增強GABA介導(dǎo)的神經(jīng)元活性抑制是用作FS的常用藥物慎宾。然而丐吓，在FS早期，GABAergic信號增強可能加重癲癇活動趟据。在這里券犁，我們發(fā)現(xiàn)在斑馬魚幼魚中，GABRG2的表達隨著PTZ的誘導(dǎo)而增加汹碱，這可能是對緊張性抑制降低的適應(yīng)性反應(yīng)粘衬。另一方面，攜帶GABRG2（F343L）突變的斑馬魚咳促，在該模型中稚新，GABRG2的表達顯著下降，在高溫和PTZ誘導(dǎo)下誘發(fā)癲癇的易感性增加跪腹，進一步表明GABA傳遞的失調(diào)在FS中發(fā)揮了重要作用褂删。然而，GABRG2表達的增加和減少在FS的炎癥過程中是否具有相同的調(diào)控機制尺迂，仍有待進一步研究。

結(jié)論

綜上所述冒掌，我們證實了FS中誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥噪裕，促炎因子特別是IL-1β和IL-6的表達增加是癲癇發(fā)生的原因。我們的研究結(jié)果還表明股毫，GABRG2的失調(diào)可能在發(fā)熱相關(guān)癲癇的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用膳音。此外，抗炎策略可能能夠抑制癲癇發(fā)作铃诬，炎癥成為發(fā)燒相關(guān)癲癇治療的潛在靶點祭陷。

基金：江蘇省自然科學(xué)基金資助項目(項目No.BK20201440)苍凛，國家自然科學(xué)基金項目（82271487,81771404），江蘇省高等學(xué)校重點學(xué)術(shù)發(fā)展項目（PAPD）兵志。

原文：Liang, W., Wang, J., Sui, J., Yun, F., Shen, Y., Zhou, J., Wu, Y., Shen, D., and Zhang, Q. Inflammation as a target for the treatment of fever-associated epilepsy in zebrafish larvae. International Immunopharmacology, 2023, 116.

詳細網(wǎng)址：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S156757692300125X